PREPARO DE SOLUÇÕES PARA MICROSCOPIA ELETRÔNICA

TAMPÃO FOSFATO 0,1M

SOLUÇÃO A – Fostato monossódico- 0,2M

NaH² »PO 4.2H ²O …………………………………………………………….. 15,6g
H²O destilada …………………………………………………………………….. 100mL

SOLUÇÃO B – Fosfato dissódico – 0,2M
NaH ²HPO 4.12H ²O …………………………………………………………… 35,8g
H²O destilada …………………………………………………………………….. 100mL

TAMPÃO 0,1M pH7,2
Solução A …………………………………………………………………………… 28mL
Solução B …………………………………………………………………………… 72mL
H²Od ………………………………………………………………………………… 100mL

TAMPÃO 0,1M pH 7,4
Solução A …………………………………………………………………………… 19mL
Solução B …………………………………………………………………………… 81mL

H²Od ………………………………………………………………………………… 100mL

TAMPÃO CACODILATO 0,2M (Solução estoque)

Na(CH3)2AsO2.3H20(PM214) …………………………………………… 42,8g
H2Od ……………………………………………………………………………….. 100mL

TAMPÃO CACODILATO 0,2M – solução estoque 0,2M colocar HCI 0,2N até obter o pH desejado.

TAMPÃO CACODILATO 0, 1M pH 7,2
Solução estoque …………………………………………………………………. 50mL
HCI 0,2N ………………………………………………………………………….. 4,2mL
H20d ……………………………………………………………………………….. 100mL

TAMPÃO CACODILATO 0, 1M pH 7,4
Solução estoque …………………………………………………………………. 50mL
HCI 0,2N ………………………………………………………………………….. 2,7mL
H20d ……………………………………………………………………………….. 100mL

SOLUÇÃO DE KARNOWSKY

Solução A: Preparo do glutaraldeído:
– 100 mL de glutaraldeido 25%
– 400mL de tampão fosfato 0,1M

Solução B: Preparo do paraformaldeido:

– 20g de paraformaldeido

– 500ml de água destilada

Esquentar a 60ºC para diluir, acrescentar 1 a 2 gotas de NaOH para clarear a solução.

Preparo da solução de Karnowsky
– 500mL da solução A
– 500mL da solução B = 1000mL de Karnowsky, acertar pH 7,4.

PREPARO DO FIXADOR KARNOVSKY MODIFICADO.

Glutaraldeído 2,5%,( formaldeído 2,57% em tampão cacodilato de sódio 0,05M, pH 7,2, CaCI2 0,001M.)

– 10 mL de Glutaraldeído 25 %

– 20 mL de Formaldeído 10 %

– 25 mL de Tampão cacodilato de sódio 0,2M, pH 7,2
-1 mL de CaCl2 0,1M

– 44mL de Água destilada

Preparo do parafolmaldeído a 8%
Preparar e reservar uma solução contendo:

– 2g de NaOH (Hidróxido de sódio)

– 50 ml de água

– 40g de paraformaldeído

Em um béquer de 500 ml colocar 450 ml de água destilada e aquecer até 60 (a
água pode ser levada ao micro-ondas por cerca de 3 minutos).

Levar a água em agitador magnético mantendo a temperatura de 60ºC.

Pesar 40g de paraformaldeído e diluir na água aquecida.

Gotejar a solução de hidróxido de sódio (preparada previamente) até que se
obtenha uma solução transparente.

Durante este processo, controlar a temperatura com o auxílio de um termômetro.

Ao final, filtrar a solução em papel de filtro e completar com água até um volume de 500 ml.

Distribuir a solução final em frascos de 100 ml e armazenar no freezer.

Preparo da solução de Karnovsky (Karnovsky, 1965) (volume final de 100ml)

– 50 ml de paraformaldeído a 8%

– 10 ml de glutaraldeído 25%

– Completar com tampão fosfato 0,2M, pH 7,4